明膠-瓊脂糖凝膠 4FF 是采用溴化氰法將明膠耦合到瓊脂糖凝膠 4FF 基質(zhì)上的一種親和層析填 料。明膠是一種高分子糖蛋白，在多種細胞的表面和許多細胞外液（包括血漿）中都發(fā)現(xiàn)了明膠的 存在，它可以特異性的結(jié)合纖維連接蛋白。明膠瓊脂糖凝膠 4FF 是專為純化或除去纖維連接蛋白的 一種親和層析填料。

1 技術(shù)指標(biāo)

2 使用方法

2.1 準(zhǔn)備凝膠

（1）讓凝膠和所有的試劑達到工作時的溫度。

（2）配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。

（3）明膠瓊脂糖凝膠 4FF 是保存在 20%的乙醇溶液中，取適量凝膠，清洗掉 20%的乙醇，抽 干。用緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1 的比例）配成勻漿。

2.2 裝柱

（1）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端 無氣泡。

（2）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口， 使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

（3）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的 1.33 倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用 2~3 倍柱體 積的緩沖液平衡柱子。

2.3 平衡 讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和 pH 不變。

2.4 上樣 （1）樣品用平衡液配制，常用磷酸鹽緩沖液或 Tris-HCl 緩沖液，渾濁的樣品要離心和過濾后 上樣。

（2）一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo) 產(chǎn)品。

2.4 洗脫 明膠-瓊脂糖凝膠 4FF 可以采用不同的方式洗脫纖維連接蛋白：

（1）使用含有溴鹽的緩沖液，例如溴化鈉或溴化鉀，并在低于平衡緩沖液 pH 值的條件下洗脫。 一種推薦的洗脫緩沖液是：0.05 M 的醋酸鈉，pH 值 5.0，含 1.0 M 的溴化鈉或溴化鉀。

（2）可以在平衡緩沖液中加入 8 M 的脲，來洗脫吸附在凝膠上的纖維連接蛋白。

（3）纖維連接蛋白還可以通過在平衡緩沖液中添加精氨酸來進行洗脫。

2.6 再生 根據(jù)樣品的性質(zhì)，明膠瓊脂糖凝膠 4FF 可以再生，以達到重復(fù)使用的目的?？梢圆捎?2-3 柱體 積的高 pH 值（0.1 M 的 Tris - HCl，0.5 M NaCl，pH 值 8.5）的緩沖液和低 pH 值（0.1 M NaAC，0.5 M NaCl，pH 值 4.5）的緩沖液交替清洗凝膠。一個周期重復(fù) 3 次，然后用 3-5 倍柱體積的平衡緩沖 液平衡，即可進行下次試驗。如果在純化過程中使用了洗滌劑或變性劑（如 8 M 尿素），那么這些 洗滌劑也可以用于洗脫緩沖液中。 2.7 清洗 在一些應(yīng)用中，像變性的蛋白質(zhì)或脂類這樣的樣品，在再生過程沒有被洗脫下來，可以通過加 入一些洗滌劑，例如：0.1％的 Triton X-100 ，在 37°C 的條件下洗一會。立即用至少 5 倍柱體積的 結(jié)合緩沖重新平衡。 2.8 儲存 明膠-瓊脂糖凝膠 4FF 應(yīng)儲存在 4-8℃，20%的乙醇溶液中。 特別注意： 上樣之前，樣品必須去除色素，否則色素會被吸附到填料上，影響填料的正常使用。

  備注：產(chǎn)品信息可能會有優(yōu)化升級。請以實際標(biāo)簽信息為準(zhǔn)。

明膠-瓊脂糖凝膠4FF

明膠-瓊脂糖凝膠4FF