過氧化氫酶（CAT）測定試劑盒 微量法說明書

貨號: BC0205 規(guī)格:100T/96S

產品內容： 提取液：100mL×1 瓶，4℃保存； 工作液：24mL×1 瓶，4℃保存；

產品簡介： CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是主要的 H2O2清除酶，在活性氧清除系 統(tǒng)中具有重要作用。 H2O2在 240nm 下有特征吸收峰，CAT 能夠分解 H2O2，使反應溶液 240nm 下的吸光度隨反應時間而下降，根 據吸光度的變化率可計算出 CAT 活性。

過氧化氫酶（CAT）測定試劑盒 微量法操作步驟：

一、粗酶液提?。?1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液，超聲波破碎細菌或 細胞（功率 20%或 200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒。重復 30 次）；8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 2、 血清（漿）樣品：直接檢測。

二、操作步驟 1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min，調節(jié)波長到 240nm，蒸餾水調零。 2、 測定前將 CAT 檢測工作液 37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）水浴 10min。 3、 加入 10μL 樣本和 190μL 工作液，混勻 5s 或者在酶標儀上振動 5s 并立即計時，記錄 240nm 下的初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。計算ΔA=A1-A2

三、CAT 活性計算（用石英比色皿）：

1、 血清（漿）CAT 活力的計算: 單位的定義：每毫升血清（漿）在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/mL）＝反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數（43.6×10 -3）×ΔA=459×ΔA

2、 組織 CAT 活力計算： （1） 按樣本蛋白濃度計算： 單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/mg prot）＝反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數（43.6×10 -3）×ΔA÷蛋白質濃度（mg/mL） =459×ΔA÷蛋白質濃度（mg/mL） （2） 按樣本鮮重計算： 單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/g mass）＝反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2 消光系數（4.36×10 4）×ΔA÷樣本鮮重（g/mL） =459×ΔA÷樣本鮮重（g/mL）

3、 細菌或細胞中 CAT 活力計算： 單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞在每分鐘反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/10 4 cell）＝反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數（4.36×10 4）×ΔA÷細胞密度（10 4 cell /mL） =0.917×ΔA V 反總：反應體系總體積，2×10 -4L；ε: NADH 摩爾吸光系數，4.36×10 4L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm； V 樣：加入樣本體積，0.01ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，1min。W，樣本質量，g；Cpr： 上清液蛋白濃度，mg/ml；500：細胞或細菌總數，500 萬。

CAT 活性計算（用 96 孔板）：

1、 血清（漿）CAT 活力的計算: 單位的定義：每毫升血清（漿）在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/mL）＝反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數（4.36×10 4）×ΔA=918×ΔA

2、 組織 CAT 活力計算： （1） 按樣本蛋白濃度計算： 單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/mg prot）＝反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數（4.36×10 4）×ΔA÷蛋白質濃度（mg/mL） =918×ΔA÷蛋白質濃度（mg/mL） （2） 按樣本鮮重計算： 單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/g mass）＝反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2 消光系數（4.36×10 4）×ΔA÷樣本鮮重（g/mL） =918×ΔA÷樣本鮮重（g/mL）

3、 細菌或細胞中 CAT 活力計算： 單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞在每分鐘反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2降解定義為一個酶活力單位。 CAT（U/10 4 cell）＝反應總體積÷樣本體積÷反應時間÷H2O2消光系數（4.36×10 4）×ΔA÷細胞密度（10 4 cell /mL） =1.836×ΔA V 反總：反應體系總體積，2×10 -4L；ε: NADH 摩爾吸光系數，4.36×10 4L/mol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm； V 樣：加入樣本體積，0.01ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，1min。W，樣本質量，g；Cpr： 上清液蛋白濃度，mg/ml；500：細胞或細菌總數，500 萬。 1、 預實驗如果發(fā)現(xiàn)酶活性過高（其實 OD 值過大），可用提取液適當稀釋樣品。 2、 如果酶活性過低，延長反應時間（3 分鐘之內），并將反應時間準確代入計算公式。

一、粗酶液提?。?1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液，超聲波破碎細菌或 細胞（功率 20%或 200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒。重復 30 次）；8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 2、 血清（漿）樣品：直接檢測。

一、粗酶液提取： 1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液，超聲波破碎細菌或 細胞（功率 20%或 200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒。重復 30 次）；8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 2、 血清（漿）樣品：直接檢測。

一、粗酶液提?。?1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液，超聲波破碎細菌或 細胞（功率 20%或 200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒。重復 30 次）；8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 2、 血清（漿）樣品：直接檢測。

一、粗酶液提?。?1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液，超聲波破碎細菌或 細胞（功率 20%或 200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒。重復 30 次）；8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 2、 血清（漿）樣品：直接檢測。

一、粗酶液提取： 1、 細菌、細胞或組織樣品的制備 收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每 500 萬細菌或細胞加入 1ML 提取液，超聲波破碎細菌或 細胞（功率 20%或 200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒。重復 30 次）；8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。 2、 血清（漿）樣品：直接檢測。

相關文獻：
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GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率，計算 GDH 活性。

GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率，計算 GDH 活性。

GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率，計算 GDH 活性。

GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率，計算 GDH 活性。

GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率，計算 GDH 活性。

GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率，計算 GDH 活性。

GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率，計算 GDH 活性。

GDH（EC 1.4.1.2）廣泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同參與谷氨酸的合成，在氨同化和轉化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通過測定 340nm 吸光度的下降速率，計算 GDH 活性。