線粒體提取試劑盒
貨號：SM0020
規(guī)格：50T/100T
保存：四周內(nèi)使用可 4℃儲存，長期保存請置于-20℃

產(chǎn)品內(nèi)容：

產(chǎn)品簡介：
    用于從動物細(xì)胞或組織中分離出完整而純化的線粒體。適合于動物軟組織（肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細(xì)胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究。

操作步驟：
1. 樣本處理
   a. 組織勻漿：稱取 100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入 1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨組織 20 次；
   b. 培養(yǎng)細(xì)胞勻漿：消化細(xì)胞，PBS洗滌，800g離心 5~10 min收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)。每次提取需要 5×10 7 個細(xì)胞，加入 1.0 mL冰預(yù)冷的Lysis Buffer重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨 30~40 次。
2. 將組織或細(xì)胞勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管，4℃，1000g 離心 5 min。
3. 取上清，轉(zhuǎn)移新的離心管中，4℃，1000g 再次離心 5 min。
4. 取上清，轉(zhuǎn)移新的離心管中，4℃， 12,000 g 離心 10 min。離心后的上清含胞漿成分，可從中提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管，線粒體沉淀在管底。
5. 往線粒體沉淀中加入 0.5 mL Wash Buffer 重懸線粒體沉淀，4℃，1000 g 離心 5 min。
6. 取上清，轉(zhuǎn)移新的離心管中，4℃， 12,000 g 離心 10 min。棄上清，高純度的線粒體沉淀在管底。
7. 用 50 -100μL Store Buffer 或合適的反應(yīng)緩沖液重懸線粒體沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事項(xiàng)：
    1. 為保證獲得完整的線粒體，務(wù)必做到：*，全程低溫操作；第二，快速；第三，在不破壞亞細(xì)胞器的情況下破碎細(xì)胞，這是制備線粒體的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細(xì)胞特別是貼壁培養(yǎng)細(xì)胞在用玻璃勻漿器勻漿時較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴(yán)密的研杵上下研磨培養(yǎng)細(xì)胞。
    2. 以離心力g計(jì)算正確的離心速度，不同的離心機(jī)可據(jù)此計(jì)算離心速度。
    3. 進(jìn)行Western Blot和 2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解線粒體。
       轉(zhuǎn)速與離心力換算：
       G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２
       G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數(shù)來表示；
       [rpm]２ 即：轉(zhuǎn)速的平方； R為半徑，單位為厘米。

相關(guān)產(chǎn)品：

P1020 1×PBS ， PH7.2-7.4 ， 0.01M
P1015 4× 蛋白上樣緩沖液（含 DTT ）
SN0020 細(xì)胞核提取試劑盒

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