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Cell counting KIT-8 (CCK-8)

產(chǎn)品簡介：
Cell counting KIT-8 (CCK-8)簡稱CCK-8 試劑盒，為MTT 法的替代方法，是一種基于WST（水溶性四唑鹽，化學(xué)
名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的
快速高靈敏度檢測試劑盒。CCK-8 試劑盒可用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗(yàn)
Cell counting KIT-8 (CCK-8)使用說明：
一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（測定細(xì)胞具體數(shù)量時(shí)）
1、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。
2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5 個細(xì)胞濃度梯度，每組3-6 個復(fù)孔。
3、接種后培養(yǎng)細(xì)胞貼壁，然后加CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測定OD 值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫
坐標(biāo)（X 軸），OD 值為縱坐標(biāo)（Y 軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（試用
此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要*，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8 后的培養(yǎng)時(shí)間。）
二、細(xì)胞活性檢測
1、在96 孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（在37℃,5% CO2 的條件下）。
2、向每孔加入10μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD 值的讀數(shù)）。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4 小時(shí)。
4、用酶標(biāo)儀測定在450nm 處的吸光度。
5、如果暫時(shí)不測定OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M 的HCl 或者1%SDS(W/V)
溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
三、細(xì)胞增值-毒性檢測
1、在96 孔板中配置100 μL 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24 小時(shí)（在37 ℃，5% CO2 的條件下）。
2、向培養(yǎng)板加入10μL 不同濃度的待測物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12、24 或48 小時(shí)）。
3、向每孔加入10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD 值的讀數(shù)）。如果待測物質(zhì)
有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加
入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。
4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4 小時(shí)。
5、用酶標(biāo)儀測定在450 nm 處的吸光度。
6、如果暫時(shí)不測定OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M 的HCl 或者1%SDS(W/V)
溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化