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產(chǎn)品名稱:核蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品型號:R0050-100T

產(chǎn)品報(bào)價(jià):

產(chǎn)品特點(diǎn):產(chǎn)品簡介: 本核蛋白提取試劑盒提供了一種簡單、方便的從培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織中抽提核蛋白的方法。整個(gè)過程只需約60分鐘就可以將核蛋白和漿蛋白從細(xì)胞中分離出來。得到的蛋白可以用于Western blot等實(shí)驗(yàn)。本試劑盒通過漿蛋白抽提試劑使細(xì)胞膨脹破裂,釋放出胞漿蛋白,再通過離心得到細(xì)胞核。然后通過核蛋白抽提試劑抽提得到細(xì)胞核蛋白。本試劑盒可以抽提50個(gè)樣品。

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R0050-100T核蛋白提取試劑盒的詳細(xì)資料:

核蛋白提取試劑盒
核蛋白提取試劑盒提供了一種簡單、方便的從培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織中抽提核蛋白的方法。整個(gè)過程只需約60分鐘就可以將核蛋白和漿蛋白從細(xì)胞中分離出來。得到的蛋白可以用于Western blot等實(shí)驗(yàn)。本試劑盒通過漿蛋白抽提試劑使細(xì)胞膨脹破裂,釋放出胞漿蛋白,再通過離心得到細(xì)胞核。然后通過核蛋白抽提試劑抽提得到細(xì)胞核蛋白。本試劑盒可以抽提50/100個(gè)樣品。

核蛋白抽提試劑盒

對于體外培養(yǎng)細(xì)胞:
1.根據(jù)用量取適當(dāng)?shù)臐{蛋白抽提試劑和核蛋白抽提試劑加入 PMSF,使 PMSF 的終濃度為 1mM。PMSF
需現(xiàn)用現(xiàn)加,若目標(biāo)蛋白含有豐富的半胱氨酸,可以在兩種蛋白抽提液中加入 DTT 終濃度 0.5mM。
2.對于貼壁細(xì)胞,去除培養(yǎng)液,用 PBS 洗一遍,收集細(xì)胞,或用 EDTA 消化后吹打下細(xì)胞(好不用胰酶硝化,以免過度消化蛋白)。500 g 離心 2~3 分鐘收集細(xì)胞,吸盡上清留下沉淀備用。
3.對于懸浮細(xì)胞:用 PBS 洗一遍,500 g 離心 2~3 分鐘收集細(xì)胞,吸盡上清,留下細(xì)胞沉淀備用。
4.按照每 20ul 細(xì)胞沉淀加入 200ul 漿蛋白抽提試劑的比例加入裂解液。
5.高速劇烈渦旋 15 秒,使細(xì)胞*分散開。若沉淀沒有*分散,可以適當(dāng)延長渦旋時(shí)間。
6.500 g 離心 2~3 分鐘,去上清。
7.加入漿蛋白抽提試劑 200ul,高速劇烈渦旋 5 秒,冰浴 10 分鐘。
8.高速劇烈渦旋 5 秒,4℃12000~16000g 離心 10 分鐘。
9.上清即為抽提得到的細(xì)胞漿蛋白??蛇M(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western,但蛋白濃度很低,可能需要濃縮。
10.*吸盡殘余的上清,避免細(xì)胞漿蛋白污染,加入 100ul 核蛋白抽提試劑。
11.高速渦旋 15 秒或用移液器吹打*分散,放回冰浴中 5 分鐘,4℃12000~16000g 離心 10 分鐘。
12.立即吸取上清預(yù)冷的樣品管中,此即為抽提得到的細(xì)胞核蛋白。可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或-70℃凍存。


對于組織樣品:
把組織稱重后,盡可能切成非常細(xì)小的碎片,按每 50mg 組織加入 200ul-500ul PBS,用勻漿器冰上勻漿勻漿制成細(xì)胞懸液,500 g 離心 2~3 分鐘收集細(xì)胞,吸盡上清,收集沉淀。加入 200ul 漿蛋白抽提試劑后接上述步驟 5

 

 

參考文獻(xiàn):
《Lactobacillus plantarum NA136 improves the non-alcoholic fatty liver disease by modulating the AMPK/Nrf2 pathway》 作者:Zijian Zhao,Chao Wang ,Li Zhang,Yujuan Zhao,Cuicui Duan,Xue Zhang,Lei Gao,Shengyu Li 期刊:Applied microbial and cell physiology 影響因子:3.67 PMID:31115630
《Luteoloside attenuates neuroinflammation in focal cerebral ischemia in rats via regulation of the PPARγ/Nrf2/NF-κB signaling pathway》 作者:Qiaoling Li,Zixia Tian,Minghui Wang,Jiejian Kou,Chunli Wang,Xuli Rong,Jing Li,Xinmei Xie,Xiaobin Pang 期刊:International Immunopharmacology 影響因子:3.361 PMID:30502652
 

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