免疫印記套裝的作用：實現(xiàn)目標蛋白的分子量分層
免疫印記套裝是用于執(zhí)行免疫印記實驗（WesternBlot，WB）的標準化試劑盒，其核心作用是通過“凝膠電泳分離蛋白質→轉膜→抗體特異性結合→信號檢測”的流程，實現(xiàn)對生物樣本（如細胞、組織提取物）中特定目標蛋白質的定性鑒定、半定量分析及分子量驗證，是分子生物學、免疫學、細胞生物學等領域研究蛋白質表達與修飾的核心工具。
免疫印記套裝的作用：從“蛋白質分離”到“目標蛋白確認”的全流程支持
免疫印記實驗的本質是“通過抗體的特異性結合，定位并檢測復雜蛋白質混合物中的單一目標蛋白”，而WB套裝通過整合實驗所需的關鍵試劑、耗材（部分套裝含工具），解決了“試劑單獨采購、配比復雜、批次差異大”的問題，確保實驗流程標準化、結果可重復。其具體作用可拆解為以下4個核心環(huán)節(jié)：
1.蛋白質分離：實現(xiàn)目標蛋白的分子量分層
套裝中通常包含SDS-PAGE凝膠制備試劑（如SDS、丙烯酰胺、Tris-HCl緩沖液、過硫酸銨（APS）、四甲基乙二胺（TEMED）），作用是通過“十二烷基硫酸鈉（SDS）變性蛋白質+聚丙烯酰胺凝膠（PAGE）電泳”，根據(jù)蛋白質的分子量大小將復雜樣本（如細胞裂解液中的上千種蛋白質）分離成不同的“蛋白條帶”：
原理：SDS使蛋白質帶負電，電泳時蛋白分子在凝膠中向正極移動，分子量小的蛋白移動速度快（跑在凝膠下方），分子量大的蛋白移動慢（跑在凝膠上方），最終實現(xiàn)“按分子量分層”，為后續(xù)“精準定位目標蛋白”奠定基礎。
套裝優(yōu)勢：預制凝膠（部分套裝提供）可直接使用，無需手動配制（避免丙烯酰胺毒性暴露）；配套緩沖液（如電泳緩沖液）已預混，無需計算濃度，降低操作誤差。
2.蛋白質轉膜：將凝膠中的蛋白轉移至固相膜
套裝中包含轉膜試劑（如轉膜緩沖液、甲醇）和固相膜（硝酸纖維素膜NC膜或聚偏氟乙烯膜PVDF膜），作用是將凝膠中分離好的蛋白條帶“轉移”到固相膜上（此過程稱為“轉膜”）：
原理：利用“電轉移法”（多數(shù)WB采用濕轉或半干轉），在電場作用下，凝膠中的蛋白質從凝膠內部遷移并吸附到固相膜表面，形成與凝膠中條帶位置一致的“膜上蛋白條帶”；固相膜的疏水特性可穩(wěn)定結合蛋白質，便于后續(xù)抗體孵育。
套裝優(yōu)勢：提供適配轉膜方式的緩沖液（如濕轉專用高離子強度緩沖液、半干轉專用低電阻緩沖液），并搭配膜的預處理試劑（如PVDF膜需用甲醇激活），確保轉膜效率（目標蛋白轉移率＞80%）。
3.抗體結合：特異性識別目標蛋白
套裝中包含封閉液（如5%脫脂牛奶、BSA溶液）、洗滌緩沖液（如TBST，含Tris-HCl、NaCl、Tween-20），部分套裝還提供“內參抗體”（如β-actin、GAPDH抗體），作用是通過“封閉→一抗孵育→洗滌→二抗孵育→洗滌”的流程，讓特異性抗體與膜上的目標蛋白結合：
封閉：用封閉液填充膜上未結合蛋白的“空白位點”，避免后續(xù)抗體“非特異性結合”（減少背景信號，避免假陽性）；
一抗孵育：一抗（針對目標蛋白的特異性抗體）與膜上的目標蛋白結合，實現(xiàn)“目標蛋白定位”；
二抗孵育：二抗（針對一抗的抗體，如抗兔IgG-HRP）與一抗結合，同時二抗偶聯(lián)“信號標記物”（如辣根過氧化物酶HRP、堿性磷酸酶AP），為后續(xù)信號檢測做準備；
洗滌：用TBST去除未結合的游離抗體，進一步降低背景干擾。
套裝優(yōu)勢：封閉液、洗滌緩沖液均為即用型，無需自行配制；內參抗體可用于“校正上樣量差異”（確保不同樣本的蛋白上樣量一致，半定量結果可靠）。
4.信號檢測：可視化目標蛋白條帶
套裝中包含底物顯色試劑（如HRP對應的ECL化學發(fā)光底物、AP對應的BCIP/NBT顯色液），作用是通過“標記物-底物反應”產(chǎn)生可檢測的信號，將膜上的目標蛋白條帶“可視化”：
化學發(fā)光法（常用）：HRP催化ECL底物產(chǎn)生熒光信號，通過X光片曝光或化學發(fā)光成像儀捕捉信號，形成黑色條帶（條帶強度與目標蛋白含量正相關，可半定量）；
顯色法：AP催化BCIP/NBT底物產(chǎn)生藍紫色沉淀，直接在膜上形成可見條帶（操作簡單，適合定性分析）。
套裝優(yōu)勢：底物試劑穩(wěn)定性高（如ECL底物發(fā)光持續(xù)時間＞1小時），信號強度均勻，確保條帶清晰、無拖尾，便于結果分析。
更新時間：2025-09-03
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