Fluo-3, AM
貨號：S21010
保存：-20℃干燥避光保存，有效期一年。
產品說明：
CAS：121714-22-5
中文名：鈣熒光探針Fluo-3, AM
英文名：1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthe nyl)phenoxy]-2-(2- amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tet raacetic acid, pentaac etoxymethyl ester
結構式：
分子式：C51H50Cl2N2O23
分子量：1129.85
性質：
1. 外觀：紅色粉末
2. 純度：≥90% （HPLC）
3. 產品描述：
Fluo-3, AM是常用的檢測細胞內鈣離子濃度的熒光探針之一。它穿透細胞膜進入細胞后被細胞內的酯酶剪切形成Fluo-3 ，從而被滯留在細胞內，Fluo-3 若以游離配體形式存在時幾乎是非熒光性的，但是當它與細胞內鈣離子結合后可以產生較強的熒光，大激發(fā)波長為506nm ，大發(fā)射波長為526nm 。實際檢測時推薦使用的激發(fā)波長為488nm 左右，發(fā)射波長為 525～530nm ?？梢允褂眉す夤簿劢癸@微鏡或流式細胞儀檢測細胞內鈣離子濃度的變化。
操作說明：（for Human T cells）
1，試劑
2 mM 的Fluo-3, AM/DMSO （將1mg Fluo-3, AM 溶于442μL DMSO ）
Pluronic F127
Hanks balanced salt solution（HBSS）
HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl， 1mM CaCl2， 0.5mM MgCl2，5mM Glucose，0.1% BSA，pH 7.4 ）
2，操作
（1） 向Fluo-3, AM/DMSO溶液中加入16.5mg Pluronic F127，Pluronic F127 可以防止Fluo-3, AM 在HBSS 中
聚合并能幫助其進入細胞。
（2） 用HBSS 稀釋Fluo-3, AM 溶液，制備4μM 的Fluo-3, AM 工作液。
（3） 將Fluo-3, AM 工作液加入細胞，在37℃培養(yǎng)20分鐘。
（4） 加入5 倍體積的含有1%胎牛血清的HBSS，再繼續(xù)培養(yǎng)40分鐘。
（5） 用HEPES buffer saline洗滌細胞 3 次，然后用HEPES buffer saline使細胞重懸浮，制成1×105 cells/mL 的溶液。
（6） 37 ℃下培養(yǎng)10分鐘，然后用該細胞進行熒光鈣離子檢測。激發(fā)波長506nm，發(fā)射波長526nm 。

注意：標記的條件因細胞種類而異，在每次實驗前，請先確定佳條件。以上方法僅供參考。