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ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算實(shí)例

更新時(shí)間：2023-03-31

點(diǎn)擊次數(shù)：1625

數(shù)據(jù)讀取和處理

以夾心法為例

推薦使用酶標(biāo)儀進(jìn)行雙波長檢測，測定450 nm和630 nm波長下的OD值，并用450 nm的OD測定值減去630 nm的OD測定值。

ELISA的樣本和標(biāo)準(zhǔn)品通常要設(shè)置1~2個(gè)復(fù)孔進(jìn)行檢測，分別求出標(biāo)準(zhǔn)品、樣本吸光度的平均OD值。

每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值應(yīng)減去空白孔的OD值。

以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度OD值為縱坐標(biāo)，推薦使用Origin或ELISA Calc軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品中待檢物質(zhì)的含量可通過對(duì)應(yīng)OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

結(jié)果計(jì)算

若使用Origin軟件建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，詳細(xì)步驟如下：

第一步: 打開軟件，分別在A(X)列和B(Y)列輸入標(biāo)準(zhǔn)品濃度和標(biāo)準(zhǔn)品OD值。

第二步：選擇擬合曲線類型

選中上步輸入的數(shù)值，按如下操作依次點(diǎn)擊選項(xiàng)。

第三步：在左側(cè)選擇<Find X/Y>，右側(cè)勾選< Find X from Y>。完成上述操作后，點(diǎn)擊Fit按鍵，擬合曲線和相關(guān)信息將自動(dòng)生成。

第四步：查看標(biāo)準(zhǔn)曲線信息（如參數(shù)值，R-Square等）

第五步：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度

選擇第四個(gè)工作表<Fit NLF Find X from Y1>，在左側(cè)A1（Y）輸入樣本的OD值，對(duì)應(yīng)的濃度將在右列自動(dòng)生成。

注意事項(xiàng)

1. 如果樣本進(jìn)行了稀釋，計(jì)算樣本濃度時(shí)請(qǐng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

2. 若樣本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測，計(jì)算濃度時(shí)再乘以稀釋倍數(shù)。

若使用ELISA Calc軟件建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，詳細(xì)步驟如下：

第一步：將標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)在Excel表格中整理成兩列，第一列是濃度，第二列是平均OD值。

第二步：打開ELISA Calc軟件，復(fù)制Excel中數(shù)值部分，點(diǎn)軟件的<粘貼>；選擇<回歸/擬合模型>，一般優(yōu)先選擇Logistic曲線擬合（四參數(shù)）、直線回歸或二次曲線回歸；點(diǎn)擊<回歸/擬合>。

第三步：點(diǎn)<由Y計(jì)算X值>，將樣本OD值在Excel中整理成一列，右鍵選復(fù)制，然后點(diǎn)軟件的<粘貼>，點(diǎn)軟件的<復(fù)制>，即可將計(jì)算的結(jié)果到Excel中粘貼。

注意事項(xiàng)

1. 如果樣本進(jìn)行了稀釋，計(jì)算樣本濃度時(shí)請(qǐng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

2. 若樣本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測，計(jì)算濃度時(shí)再乘以稀釋倍數(shù)。

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